來(lái)源：本站 作者：jiyuanbio 時(shí)間：2025/2/19

原理

1. 分散體系：將樣本充分稀釋并分配到多個(gè)獨立的反應單元中，如基于油包水微滴生成技術(shù)的微滴式數字 PCR 會(huì )通過(guò)油包裹 PCR 體系形成無(wú)數個(gè)油包水微滴，每個(gè)微滴是一個(gè)獨立反應單元；基于微流控技術(shù)的微流控芯片式數字 PCR 則利用微流控芯片裝置使 PCR 反應體系準確快速地分散于芯片孔中。
2. PCR 擴增：在每個(gè)反應單元中進(jìn)行單獨、平行的 PCR 反應，對目標核酸分子進(jìn)行擴增。
3. 信號檢測：擴增結束后，對各個(gè)反應單元的熒光信號進(jìn)行統計學(xué)分析，有熒光信號的反應器判讀為 “1”，沒(méi)有熒光信號的反應器判讀為 “0”，從而將熒光模擬信號數字化，最終根據泊松分布原理以及陰 / 陽(yáng)性反應的比例，直接計算反應體系中待檢靶分子的拷貝數濃度。

優(yōu)勢

1. 絕對定量：常規 PCR 和實(shí)時(shí)熒光 PCR 定量檢測需已知拷貝數的標準 DNA 制定標準曲線(xiàn)，會(huì )因樣品測定條件差異造成 PCR 擴增效率不同，影響定量結果準確性。而數字 PCR 不受標準曲線(xiàn)和擴增動(dòng)力學(xué)影響，可直接讀出 DNA 的分子個(gè)數，實(shí)現絕對定量。
2. 高靈敏度：能檢測到極低拷貝數的核酸分子，原則上最低可檢測到 1 個(gè)拷貝的靶標分子，可有效區分與監測微量濃度變化，能精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，比如可以檢測出體細胞中含量極低的單個(gè)突變，能識別低至 1/100,000 的變異頻率1。
3. 高耐受性：目的序列被分配到多個(gè)微滴或反應單元中，顯著(zhù)降低了體系間的影響以及背景序列和抑制物對反應的干擾，擴增基質(zhì)效應大大減小，對樣品的純度要求相對沒(méi)那么苛刻，在檢測復雜樣本或含有抑制劑的樣本時(shí)更具優(yōu)勢。
4. 樣品需求量低：在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯優(yōu)勢，只需少量的樣本即可進(jìn)行檢測，能夠節約珍貴的生物樣本。
5. 可進(jìn)行多重檢測：多個(gè)單一的反應單元為多目標序列的高通量檢測提供了基礎，可同時(shí)對多個(gè)目標核酸分子進(jìn)行檢測和分析，提高檢測效率和信息獲取量。
6. 結果準確性和重復性好：由于每個(gè)反應單元獨立進(jìn)行反應和檢測，減少了反應之間的干擾和誤差，使得檢測結果的準確性和重復性更高，不同批次實(shí)驗之間的差異也較小。