來(lái)源：本站 作者：admin 時(shí)間：2019/1/8

【W(wǎng)hat】

C值是指物種單倍體或配子所含的DNA量，單位為pg(picogram)或Mb(million base pair), 而1pg相當于978 Mb。

【W(wǎng)hy】

對于C值檢測的意義：

1、與微衛星的擴增效率相關(guān)；

2、作為細胞核大小、花粉粒直徑等表型的預示值,  基因組大小與細胞核大小、花粉直徑等表型性狀成正相關(guān)；

3、作為生態(tài)與環(huán)境的預示值, C值與植物的生活史、地理分布、物候期、單位面積生物量、對生長(cháng)環(huán)境的敏感度（如溫度和濕度的變化）等緊密相關(guān)，還能預測長(cháng)期的變化（諸如全球變暖）所引起的植被改變；

4、利用推斷的C值來(lái)揭示古生物學(xué)的趨勢，例如,  根據化石細胞的大小，可以推斷化石的DNA含量。在植物化石中，氣孔保衛細胞的大小也可以用來(lái)估計DNA含量，進(jìn)而尋求C值的進(jìn)化趨勢；

5、C 值對物種保育具有重要的意義，大基因組的物種往往存在更大的滅絕風(fēng)險。

【How】

關(guān)于基因組大小實(shí)驗說(shuō)明

1、基因組大小的計算必須有一個(gè)適合的內參，因為外參對于樣本的精確檢測提供了過(guò)于大的樣本變化。

2、參照物植物的基因組大小應該在待測樣本的0.7到2.5倍范圍內，否則樣本的的線(xiàn)性不準確度會(huì )增加，并且要使用低中高三個(gè)范圍的參照物。

3、已知物種基因組大小的查詢(xún)網(wǎng)址：http://data.kew.org/cvalues/

4、樣本基因組大小=待測樣本的峰值/參照物的峰值*參照物基因組大?。╬g/Mb）

流式細胞儀檢測基因組大小的步驟

1、各取50mg內參和待測植物組織，放入培養皿中

2、加入500ul核裂解液

3、使用鋒利刀片切碎組織，約30—60s

4、室溫條件下孵育2—15min

5、使用CellTrics®過(guò)濾器過(guò)濾樣本

6、加入含有RNA酶的PI染色液，根據樣本的不同，室溫避光孵育30—60min

7、使用有488nm或者532nm激光光源的流式細胞儀檢測；

8、計算基因組大小，流式結果如下：

Peak	Index	Mean	Area	Area%	CV%	ChiSqu
1	1.000	98.29	1084	77.36	2.45	0.27
2	1.378	135.48	317	22.64	1.61	0.27

公式：樣本基因組大小=135.48/98.29*參照物基因組大?。╬g）

注意事項：

1、處理易褐變的材料時(shí)，即植物組織含較單寧類(lèi)、多酚類(lèi)次級代謝產(chǎn)物，可在染色過(guò)程中增加0.5 - 2 % (p/v)PVP-10/20 和/或0.01 % (p/v)的檸檬酸，pH 調節到4.5；

2、可使用其他低水平次級代謝產(chǎn)物的組織（葉柄,、花部、種子等缺乏活力的組織）

常用試劑盒：

貨號	英文名稱(chēng)	中文名稱(chēng)	測試數
05-5022	CyStain® PI Absolute P	PI精確P試劑盒	250 tests
05-5022-S	CyStain® PI Absolute P	PI精確P試劑盒(小)	50 tests
05-5023	CyStain® PI Absolute T	PI精確T試劑盒	250 tests

可供檢測機型：

機型	配置（以下均可配備自動(dòng)進(jìn)樣器）	備注
CyFlow Ploidy Analyser	532nm激光器	適用于PI試劑盒
CyFlow Cube6	488nm激光器	適用于PI試劑盒
CyFlow Cube8	488nm激光器	適用于PI試劑盒
CyFlow Space	488nm或532nm激光器	適用于PI試劑盒