基因組大小分析服務(wù)-實(shí)驗技術(shù)-廣州吉源生物科技有限公司

實(shí)驗技術(shù)

基因組大小分析服務(wù)

來(lái)源：本站作者：admin 時(shí)間：2020-9-18

基因組大小分析服務(wù)

生物單倍體基因組中DNA總量，以基因組的堿基對來(lái)表示。在真核生物中，每種生物的單倍體基因組的DNA總量是恒定的，稱(chēng)之為C值，C值反映了生物物種全部和特定的遺傳信息。不同物種的C值差別很大。

對于C值檢測的意義：1、與微衛星的擴增效率相關(guān)；2、作為細胞核大小、花粉粒直徑等表型的預示值, 基因組大小與細胞核大小、花粉直徑等表型性狀成正相關(guān)；3、作為生態(tài)與環(huán)境的預示值，C值與植物的生活史、地理分布、物候期、單位面積生物量、對生長(cháng)環(huán)境的敏感度

（如溫度和濕度的變化）等緊密相關(guān)，還能預測長(cháng)期的變化（諸如全球變暖）所引起的植被改變；4、利用推斷的C值來(lái)揭示古生物學(xué)的趨勢，例如，根據化石細胞的大小，可以推斷化石的DNA含量。在植物化石中，氣孔保衛細胞的大小也可以用來(lái)估計DNA含量，進(jìn)而尋求C值的進(jìn)

化趨勢；5、C 值對物種保育具有重要的意義，大基因組的物種往往存在更大的滅絕風(fēng)險。

目前基因組大小的精確測定只能采用測序法，由于實(shí)驗樣本數量大、測序費用高、實(shí)驗操作難度大，讓很多研究者望而卻步，使得實(shí)驗局限性很大。流式細胞術(shù)（FCM）則解決了這些弊端，同時(shí)還具備制樣方法簡(jiǎn)便、檢測速度快且結果較為準確等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛用于測定物

種的基因組大小。

基因組大小檢測的要點(diǎn)

1、基因組大小的計算必須有一個(gè)適合的內參，參照物植物的基因組大小應該在待測樣本的0.7到2.5倍范圍內，并且應使用低中高三個(gè)范圍的參照物。

2、已知物種基因組大小的查詢(xún)網(wǎng)址：http://data.kew.org/cvalues/。

3、樣本基因組大小=待測樣本的峰值/參照物的峰值*參照物基因組大?。╬g/Mb）。

實(shí)驗原理

首先需要裂解液將組織中細胞核釋放出來(lái)，并打開(kāi)DNA鏈，然后用PI染液將細胞核DNA染色，再用儀器檢測細胞核里被染色的DNA發(fā)出的熒光強度。結果的橫坐標表示熒光強度，縱坐標表示細胞數量，通常來(lái)說(shuō)，信號峰高說(shuō)明信號比較好，雜質(zhì)少。

使用Sysmex-Partec CyFlow Ploidy Analyser對植株基因組大小進(jìn)行預測(Jaroslav et.al. 2007)

從平均熒光強度可知，a.姜黃沙棗(Curcuma angustifolia) (sample G1)的基因組是已知標準品大豆(Glycine max)(standard G1, 2C=2.50pg DNA)基因組的0.847倍，據此可算出姜黃沙棗的基因組大小約為2.12pg；b.橙黃山柳菊(Hieracium aurantiacum)(Sample G1)的基因組大小是標準品玉米(Zea mays)(Standard G1, 2C=5.43pg)的1.44倍，據此可算出橙黃山柳菊的基因組大小約為7.82pg。

實(shí)驗儀器設備及方法

吉源生物采用配置532nm綠色激光的Sysmex-Partec CyFlow Ploidy Analyser，搭配Sysmex CyStain PI基因組大小檢測試劑盒，僅需半小時(shí)，即可完成基因組大小預估。實(shí)驗基本步驟如下：